In der ersten Trainingseinheit in Jerez übernahm der Gresini Ducati-Fahrer Alex Marquez die Führung und überholte seinen Bruder Marc, der den Großteil der Sitzung angeführt hatte. Für die meisten der 45 Minuten war es ein Marquez 1-2. Alex Marquez traf jedoch die strategische Entscheidung, am Ende der Sitzung die Reifen zu wechseln, was ihm ermöglichte, seinen Bruder zu überholen und mit der schnellsten Zeit von 1m36.630s zu beenden. Er war eine halbe Sekunde schneller als Marc Marquez und sein Teamkollege. Maverick Vinales, der am Circuit of the Americas dominiert hatte, sicherte sich den dritten Platz, nachdem er ein neues Reifenset montiert hatte. Aleix Espargaro verbesserte seine Position in der letzten Runde und beendete das Rennen auf dem vierten Platz. Franco Morbidelli, auf einer 2024 Ducati, kam auf dem fünften Platz ins Ziel, während andere Fahrer auf demselben Motorrad, Jorge Martin, Pecco Bagnaia und Enea Bastianini, den neunten, zwölften und dreizehnten Platz belegten. Der KTM-Wildcard-Fahrer Dani Pedrosa war der schnellste unter den RC16-Fahrern und belegte den sechsten Platz, dicht gefolgt von Brad Binder. Die anderen Wildcard-Fahrer, Lorenzo Savadori und Stefan Bradl, belegten die Plätze 23 und 24, wodurch Luca Marini auf den letzten Platz zurückfiel. Savadori fährt ein experimentelles Motorrad mit neuen Funktionen, die Aprilia später in der Saison nutzen möchte. Bradls RC213V hingegen erfuhr im Vergleich zu regulären Motorrädern erhebliche Änderungen in Bezug auf Aerodynamik und Sitzeinheit. Zwei Fahrer, Johann Zarco und Augusto Fernandez, hatten während der Sitzung Unfälle, aber Zarco erholte sich schnell und war bald wieder auf den Beinen.