Francesco Bagnaia, o atual campeão da MotoGP, terminou em primeiro na sessão de treinos de sexta-feira em Mugello, com Alex Rins da Yamaha em segundo. O tempo de volta de Bagnaia de 1m44.938s foi mais de um quarto de segundo mais rápido do que o restante do pelotão, pouco abaixo do novo recorde da pista. No entanto, Bagnaia está atualmente sob investigação por obstruir Alex Marquez durante a sessão. Apesar disso, o forte desempenho da Yamaha em Mugello continuou, com Rins mostrando sua velocidade e o novato Pedro Acosta garantindo um lugar no Q2. A queda anterior de Acosta não prejudicou seu progresso. O tempo de volta promissor de Brad Binder da KTM também foi notável, mas ele foi excluído devido aos limites da pista. O desempenho de Miguel Oliveira da Trackhouse Aprilia foi o melhor da temporada até agora, terminando em quarto lugar. Marc Marquez da Gresini Ducati conseguiu evitar a eliminação do Q1 com o quinto tempo mais rápido. Outras performances notáveis vieram de Enea Bastianini, Jorge Martin e Alex Marquez, todos pilotando Ducatis. Maverick Vinales e Aleix Espargaro garantiram as últimas vagas no Q2 com suas Aprilias. Fabio Quartararo da Yamaha terminou um quarto de segundo atrás de Rins, evitando por pouco a participação no Q1. Takaaki Nakagami da Honda teve um desempenho impressionante, superando seus companheiros de equipe da RC213V por mais de quatro décimos de segundo.